从鸡蛋更多的肌肉?PROTEO - 脂质复合物可能有助于预防肌肉质量与年龄相关的损失

在老年人中,肌肉质量低与功能能力下降和残疾风险增加密切相关。肌肉生长抑制素是肌肉生长的负调节因子,已成为制药公司设计治疗方法以解决年龄相关性肌肉损失的重要目标。

在临床前研究中,抗肌肉生长抑制药物可以增加肌肉的大小和力量。促肌素是一种由已受精卵黄制成的蛋白质-脂类复合物,具有抗肌生成抑制素的活性。当作为补充时,在啮齿动物和年轻男性中都可以观察到循环肌生成抑制素水平的降低。福妥乐平与抵抗运动联合使用也能降低肌生成抑制素,增加瘦体重。

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理解SARS-CoV-2刺突蛋白的结构

糖基化是由碳水化合物共价连接totarget大分子,通常是蛋白质的过程。这种修改提供各种功能,包括引导蛋白质折叠(1,2),促进蛋白质稳定性(2),并参与信号功能(3)。

SARS-CoV-2蛋白的带状结构
SARS-COV-2 S蛋白带状结构

SARS-CoV的-2利用一个广泛糖基化的钉(S)蛋白,从病毒表面突出,以结合至血管紧张素转化酶2(ACE2)介导宿主细胞条目。疫苗的发展一直专注于这种蛋白,这是体液免疫应答的焦点。了解SARS-COV-2病毒的刺突蛋白(S)的聚糖结构将基于glycoprotine-候选疫苗的发展至关重要。

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回顾:无细胞表达系统帮助描述了参与缺氧反应的蛋白质

的HIF-1α-VHL蛋白-ElonginB-ElonginC复杂Structur
HIF-1a-pVHL-ElonginB-ElonginC复合体的结构

威廉·G·凯林小,彼得·拉特克利夫爵士和格雷格L. Semenza的被授予了2019年诺贝尔生理或医学表彰他们对细胞如何感知和适应氧气供应的发现。

凯林和拉特克利夫的实验室集中讨论了转录因子HIF(缺氧诱导因子)的努力。这个转录因子在细胞适应关键的对氧气供应的变化。

当氧含量升高时,细胞中含有的HIF非常少。泛素通过VHL复合物添加到HIF蛋白中,并在蛋白酶体中降解。当氧含量低(缺氧)时,HIF的数量增加。

2001年,这两个研究小组发表了描述VHL和HIF之间相互作用的文章,这些文章被诺贝尔奖组织在他们的文章中引用新闻稿关于今年的奖项。(1、2)。两项研究均表明,在正常氧条件下脯氨酸残基P564的羟基化使VHL能够识别并结合HIF。

使用细胞自由表达(即,TNT耦合转录/翻译系统),这两个实验室在表征VHL:HIF相互作用方面都发挥了关键作用35-S下正常或处于缺氧工作站经由TNT系统产生的标记的蛋白质:

  • 确定的氯化亚铁和氯化钴的相互作用的影响
  • 绘制HIF发生相互作用所需的特定区域(556-574)
  • 确定HIF点突变对相互作用的影响
  • 使用合成肽阻断相互作用
  • 结论是哺乳动物细胞中的一个因子是相互作用发生的必要条件。

参考文献

  1. 伊万,男。(2001)低氧诱导因子靶向vhl介导的脯氨酸羟化破坏:对O的影响2传感科学292: 464 - 67。
  2. Jaakkola, P。等。(2001)HIF-α的靶向的复杂的希佩尔 - 林道泛素化被O2- 脯氨酰监管羟化科学202, 468 - 72。

相关文章

在无细胞系统表征复合绑定

二恶英(, 2、3、7日8-Tetrachlorodibenzo -p二氧杂环己烯,TCDD)和相关化合物(DRC的)是持久的环境污染物通过食物链逐渐积累,主要是在动物的脂肪组织中。二恶英是剧毒,可引起生殖和发育问题,损害免疫系统,干扰激素和也导致癌症。这种广泛的DRC的毒性和生物效应的范围主要是由芳香烃受体(AHR)介导的。

在动物细胞中,DRCs与AHR在细胞质中结合,然后转移到细胞核中,在那里它们影响多种靶基因的转录,包括异生物代谢酶,如CYP1A同工酶。AHR还参与免疫系统维护、蛋白质降解和细胞增殖。

丛林乌鸦(乌鸦座macrorhynchos)已被认为是用于监视环境化学品如DRC的一个合适的指示。而哺乳动物只有一个AHR形式,鸟类有多种亚型AHR如AHR1和AHR2。揭开多个禽流感亚型AHR在他们的贡献方面,以响应功能多样性的DRC由金正日最近的一项研究。研究了丛林乌鸦AHR亚型的分子和功能特征,CAHR1和jcAHR2(1)。

cAHR1和jcAHR2蛋白用蛋白AHR合成使用合成TnT快速耦合网状细胞裂解系统检查是否这些jcAHRS具有结合TCDD的潜力。TCDD结合的体外表达的亲和力Ĵ利用速度沉淀实验用蔗糖梯度cAHR蛋白质进行分析。

结果表明,两者都jcAHR1andjcAHR2能够与TCDD结合。

参考
金,E-Y(2019)芳香烃受体2潜在介导的细胞色素P450诱导1A在丛林乌鸦乌鸦座macrorhynchos)。生态毒理学和环境安全171。99-111

使用HaloTag融合蛋白进行突变分析

在最近的参考,木下和同事通过使用磷酸盐亲和力电泳技术,PHOS标签十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳(1 PHOS标签SDS-PAGE),其特征在于MEK1的在人体细胞中的磷酸化动力学。他们发现,与diferent磷酸化状态MEK1的多个变体是典型的人类细胞组成存在。

要通过使用PHOS标签SDS-PAGE(2)调查来自各种MEK1突变体的同一实验室小组进行磷酸化profling激酶活性和药物功效研究人员之间的关系。

它们在与自发黑素瘤,肺癌,胃癌,结肠癌和卵巢癌相关被引入MEK-1编码基因的导入的突变的Flexi HaloTag克隆pFN21AE0668,适用于在哺乳动物细胞中表达n端halotag融合的MEK1。继续阅读《用卤素标签融合蛋白进行突变分析》

优化压力循环样品制备自下而上的蛋白质组学

蛋白质组的大规模分析揭示了在应对疾病蛋白质组学的变化,而这些变化保持诊断和治疗复杂疾病的巨大潜力,如果蛋白质组学分析可以带入临床实验室。成功的和可靠的大规模蛋白质组学要求是可重复的,可靠的,显示很少变化的样品制备工作流程。为了使蛋白质组学进入临床实验,所需要的样品制备和分析的标准程序和工作流程产生的时间尺度上对临床有用有效的,可操作的结果。

临床蛋白质组学分析的两种最常见的样本类型是体液和组织活检。处理这类样品,首先有两个步骤:组织溶解,然后是蛋白水解消化。固体组织的溶解是最费力的工作,产生的结果也最多变。

使用Barocycler仪器的压力循环技术(PCT)的引入极大地改善了组织溶解和消化的一致性。基于pc的样品制备方案通常利用尿素作为蛋白质变性和增溶的裂解缓冲液。尿素有几个缺点,包括抑制胰蛋白酶活性和引入不必要的修饰,如氨基甲酰化。

卢卡斯和他的同事分析是否与SDC取代尿素会产生类似的组织消化轮廓和改善PCT方法。

SDC允许使用较高的温度相比,尿素,并在56℃下进行,因此在第一步骤(裂解,还原,烷基化和)。在Barocycler第二消化步骤进行了优化,并且第三步骤被消除。为了进一步降低消化时间,他们利用了快速胰蛋白酶/ Lys-C。快速胰酶/Lys-C在70℃下保持强劲的活性,允许单步进行Barocycler消化,完成消化30个周期(约30分钟)而不是105分钟,简化了方案。

数据呈现在Barocycler一种改进的传统的组织PCT方法通过用SDC,正丙醇代替尿素和蛋白水解酶,和改性的具有较高的最适温度市售酶。

论文引用的

卢卡斯等人(2019)用于临床蛋白质组学的加速Barocycler裂解和提取样品的质谱制备蛋白质组的RE j的18,399-405。

了解棉蚜对噻虫嗪的抗性机制

A.棉叶上的棉果。图片来源:克莱姆森大学 -  USDA合作推广滑轨系列,美国[CC 3.0(https://creativecommons.org/licenses/by/3.0)],通过维基共享资源
A.棉叶上的棉果。图片来源:克莱姆森大学-美国农业部合作推广幻灯片系列,美国[CC BY 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by/3.0)],通过Wikimedia Commons

新烟碱的广泛和重复使用导致了几种昆虫产生抗药性,包括棉花蚜虫、棉蚜棉蚜是一种广泛分布的有害影响西瓜,黄瓜,南瓜,棉花和柑橘作物,等等,这让它成为迄今为止经济最重要的农业害虫之一。噻虫嗪是一种新烟碱杀虫剂的是不可逆地结合在神经系统中的细胞和干涉的烟碱乙酰胆碱受体(nAChRs)与神经冲动的昆虫的发送(1)。

为了进一步了解抗争到噻虫嗪的机制和其他新烟碱类杀虫剂,吴。最近研究了(2)棉蚜对噻虫病敏感和抗噻虫病株P450转录本的表达变化。耐药菌株(特别是CYP6CY14)中有9个P450基因显著过表达。通过人工饲料和dsRNA饲喂引入RNA干扰(RNAi)检测过表达P450s的参与。

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无细胞应用:长链非编码RNA抑制转录的特性

长非编码RNA可以调节染色质状态,(1)转录和转录后活动活动。只有少数的研究已经观察到长非编码RNA调节转化过程(2)。非编码RNA BC200已被证明能够抑制翻译与翻译起始因子交互eIF4A eIF4B。

为了描述如何控制BC200翻译抑制,使用TNT系统在体外转录/翻译了多种rna (猫。# L4610)从Promega公司。每个转录/翻译反应中,RNA BC900,加入hnRNPE1和hnRNE2蛋白质。BC200活性的抑制指出,当蛋白质是成功的(3)表示。

参考文献

  1. Sosinska,P出版社。(2015)从细胞和分子角度分析卵巢癌的腹腔内侵袭性。Ginekol。波尔86年,782-86。
  2. Geisler, S.和Coller, J. (2013)RNA在意想不到的地方:在不同的细胞环境中长的非编码的RNA功能Nat.Rev。摩尔。细胞。生物14,699 - 12所示。
  3. 张,S.等。人。(2017)hnRNP E1和E2对BC200 rna介导的翻译抑制的调控FEBS快报591年,393-5。

对于Multiomic分析自动化的方法

通过使用一套“组学”技术,你可以检查其复杂的细胞过程横跨在一个生物系统中所有分子域(即,蛋白质组学,代谢组学,转录组)协同工作的方式。几项研究已在广泛示出这种统一的方法(1,2)的功率字段出版。大多数研究却没有专注于高吞吐量的发展,统一的样品制备方法,以配合高吞吐量“组学”的分析。

最近的出版物通过古铁雷斯和他的同事提出了一种简单的高通量已经优化,以提供高品质的标本进行代谢组学,蛋白质组学,以及转录从共同细胞培养物样品(3)处理(SPOT)。它们表明,该方法能够处理从细胞沉淀样品16-24到脱盐样品准备进行9小时内质谱分析。他们还证实,相比于单独的样品制备方法时,合并过程中没有牺牲数据的质量。

参考文献

1. Roume,H。(2013)从同一独特的样品中依次分离代谢物、RNA、DNA和蛋白质方法Enzymol531, 219−236。
2.瞧,a·W。等。(2017)“OMIC”途径研究致肾盂肾炎大肠杆菌的毒力。微生物学趋势25, 729−740。
3.古铁雷斯,D。。(2018)一个集成的,高通量策略Multiomic系统层面分析J.蛋白质组学RES

破伤风神经毒素:用于药物输送潜在机制

破伤风神经毒素(TeNT),由有毒物质造成梭状芽胞杆菌,是人体内最有效的神经毒素之一。的TeNT引起破伤风,其特点是痛苦的肌肉收缩和痉挛以及癫痫发作。的TeNT由轻链和重链(TTH)的。的TeNT驻留在毒素轻链的毒性(L),但像完整的TeNT,帐篷重链(TTH)和C末端结构域(TTC)单独能够结合并进入神经元。

基于这些特性,最近发表的一篇文章(1)认为TTC可能是一种很有前途的载体来运送药物到神经元。为了探索这种可能性,他们设计了包含各种帐篷碎片的融合蛋白。他们选择b细胞白血病/淋巴瘤2蛋白(Bcl-2)作为伙伴蛋白,因为Bcl-2是最有效的抗凋亡蛋白之一,大小合适(26kDa),可以作为融合伙伴。

他们在细胞和非细胞蛋白表达系统中测试了这些融合蛋白,以确定纯化的融合产物是否保留了抗凋亡和神经元迁移的特性。其中一种结构(Bcl2-hTTC)表现出了神经元结合,并阻止了由血清和NGF剥夺引起的神经元PC12细胞死亡,这可以通过抑制线粒体释放细胞色素C来证明。在体内实验中,将Bcl2-hTTC注射到小鼠舌内,观察到选择性地迁移到小鼠脑干舌下核。

  1. Watanbe Y。等。人。(2018)破伤风毒素片段和Bcl-2融合蛋白:细胞保护和轴突逆行迁移。BMC生物技术18日,39。