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技术服务科学家答应了“哪个产品适合我的问题?”“这个产品如何工作?”和“救命!出了问题!”

作为一名学生,我浪费了这么多时间,想知道哪些试验将在我自己的问题上最佳或混淆。我希望我知道我可以联系到另一个知识渊博的科学家的帮助:技术服务科学家!

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哦,你可以“glo”的方式

在Promega,我们已经使用灵敏度高、动态范围广的生物发光检测方法帮助您的实验“Glo”30年了。然而,我们发现,许多科学家仍然更熟悉比色或荧光检测等老技术,而不是发光。今年是我们的周年纪念,我们将盘点发光技术所带来的所有分析和应用。看看我们30周年庆典了解更多关于今年我们如何庆祝发光分析和技术。

继续阅读“哦,你可以”glo“的方式

设计报告构建体分析基因调控

生物荧光报告法是一种很棒的选择为了分析基因调节,因为与比色或荧光测定相比,它们提供更高的灵敏度,更宽的动态范围和更好的信号到背景比率。在典型的遗传报告器测定中,用含有报告基因上游克隆的感兴趣序列的载体转染细胞,并且报告活性用于确定靶序列如何影响实验条件下的基因表达。编码在相同或不同质粒上的第二个控制记者是必不可少的内部控制。次要记者用于标准化数据并补偿由细胞数,裂解效率,细胞活力,转染效率,温度和测量时间差异引起的可变性。

报告基因检测策略的基本介绍

对于遗传报告者测定,使用具有弱促进剂的二次对照载体,如PGK或TK,以确保对照不会干扰您的主要报告载体的激活。在类似CMV或SV40的强促进剂控制下,将对照质粒的转染或将控制记者置换常常导致转录压缩或与实验启动子的其他干扰(即反式效应)。记者测定还可用于通过在报告基因的下游或3'中插入miRNA靶位点来定量评估microRNA活性。例如,Pmirglo双荧光素酶miRNA靶表达载体基于双荧光素酶技术,用萤火虫荧光素酶作为主要报告,以监测mRNA调节和Renilla.荧光素酶作为规范化的对照记者。

在这里的技术服务,我们经常与研究人员交谈,他们刚刚开始他们的项目,并寻求关于设计他们的基因报告载体的建议。他们有这样的问题:

  • 向量中包含多少上游推动者区域?
  • 需要多少份响应元素副本来提供良好的反应?
  • 元素或周围序列的位置是否改变基因调节?
继续阅读“设计报告构建体以分析基因调节”

我有我的荧光素酶矢量,现在是什么?

选择和优化转染方法

在技​​术服务中,我们经常与他们项目开始的研究人员讨论如何仔细设计并开始他们的实验。你有令人兴奋的时候选择了荧光素酶报告量矢量(S)这将最适合您的需求;你要制作发光细胞!但是,你如何选择将传染媒介的最佳方式进入您的细胞以表达记者?什么转染试剂/方法将适用于您的细胞类型和实验?你想做瞬态(短期)转染,还是你打算建立一个稳定的细胞系列?

继续阅读“我有了荧光素酶载体,现在怎么办?”

A BiT和BRET,哪个更好?

现在Promega正在扩大其检测活细胞蛋白相互作用或内源性蛋白表达水平定量的选项,我们技术服务部门正在考虑哪个选项更好。答案是,就像许多分析一样……看情况而定!首先我们来谈谈什么是纳米牛纳米多元Technologies,然后我们将提供一些相似之处和差异,以帮助您选择最适合您个人需求的测定。继续阅读“A BiT和BRET,哪个更好?”

你的蛋白质是什么?优化蛋白酶消化以获得内部勺子

是时候分析你的蛋白质了,你正试图决定从哪里开始。你会问这样的问题:我应该选择哪种蛋白酶?在我的消化过程中我应该使用多少酶?我的消化需要多长时间?

不幸的是,没有一定尺寸的拟合答案,而不是......“它取决于”。所有蛋白酶消化物将在变性蛋白质样品之间进行平衡,以允许进入裂解位点,优化蛋白酶的条件,以及与您的工作流程和下游应用的兼容性。我们提供适用于大多数样本的一般指导方针,但通常需要优化特定样本和应用程序的条件。

在这里,我使用胰蛋白酶摘要的示例进行下游质谱法,以突出显示关键问题,以便和可以针对任何摘要进行优化的因素。继续阅读“你的蛋白质是什么?优化蛋白酶消化以获得内部勺子“

这个套件会用我的样本类型吗?

无论你是在处理细胞、组织还是造血,确保你使用正确的检测系统是成功的关键。

在技术服务中,我们经常回答关于试剂盒是否适用于特定类型的样品的问题。找到其他研究人员是否已经测试了你的兴趣样本类型的一个简单方法是搜索引文数据库,例如地中海酒吧出于套件的名称和特定的示例类型。我们还有一个可搜索的同行评审引文数据库在我们的网站上,专门引用我们产品的文件。在我们的许多产品页面上,您可以找到引用这些产品的论文清单。在技​​术服务中,我们很乐意在此搜索中帮助您,并通知您在Promega的科学家是否测试了特定的应用程序或样本类型。这些信息提供了优化自己的实验的良好起点。

一个常见问题是“Caspase-glo®MaSays可以与组织匀浆一起使用?”虽然Promega尚未通过组织匀浆测试Caspase-glo®测定,但帕尔姆加以外的科学家们使用与组织匀浆的测定成功。与几乎所有的套件一样,在目录页面上提供资源,包括引文列表。举个例子,这里是引文的链接为了Caspase-Glo®3/7测定系统。我们也有一个文章突出了检测小鼠肝脏胱天冬酶活性的引文。已经使用各种裂解缓冲液来制备本申请的组织匀浆。为了避免非特异性蛋白质降解,在裂解缓冲液中包含蛋白酶抑制剂鸡尾酒是有用的。使用蛋白酶抑制剂通常不会影响我们的测定化学品。另外,许多市售的蛋白酶抑制剂组可以使用不含胱天蛋白酶抑制剂。重要的是要考虑所用套件的特异性,并包括适当的对照,以确保荧光素酶反应按预期进行。有关引用和示例协议的更多信息,请随时在技​​术服务中联系我们我们可以帮助你开始你的样本类型。

如何选择正确的GoTaq®产品来满足我的端点PCR需求?

我们提供各种GotaQ®DNA聚合酶,缓冲区和主混音,因此我们经常回答有关哪些产品最适合研究人员需求的问题。在这一点Taq聚合酶页面,您可以通过单击页面左侧的类别来过滤产品以缩小搜索范围。以下是帮助您选择最适合PCR应用程序的匹配的指南。继续阅读“如何选择正确的Gotaq®产品以适应我对端点PCR的需求?”