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许多细胞生亚搏体育app怎么下载物学研究人员可以把他们所在部门或机构的“细胞培养向导”称为“细胞培养向导”——拥有20多年经验的技术人员,他们的细胞培养总是没有污染,表现出可靠的翻倍率,并且没有显型或基因型的异常。细胞培养需要的技能和经验。原代细胞培养更加困难,许多研究和药物应用都需要原代细胞。

然而,不重复的研究结果的诸多原因中,变异的细胞培养中脱颖而出(1)。添加到细胞培养的正常挑战大流行关机细胞培养设施和仍然限制时间和频率的研究人员可以监控他们的细胞培养系和细胞培养可变性的问题进一步放大。

治疗细胞试剂

在以细胞为基础的研究中,一种减少变异的好方法是使用冷冻储存的方法。这包括冻结大量的“储存”细胞,然后进行质量控制测试,以确保它们对处理有适当的反应。然后,无论何时你需要进行试验,只要从那批细胞中解冻另一小瓶细胞,然后开始试验——就像试验试剂一样!这种方法不需要将细胞生长到一个特定的阶段,这个阶段可能需要几天的时间,而且会带来更多的可变性。

生物制药行业已经朝着使用融解和起诉冷冻细胞的移动,一个方法,以减少可变性(3)。使用原代细胞检测是乏味的开发和难以解释,并且使转基因细胞模型与克隆细胞系已经有很多年的普遍做法。就成本和资源保存在维持在培养物中的细胞系,制备冷冻解冻和使用的细胞的银行和预先被用于监测的物质或生物的活性随着时间的推移,以确保一致性生物测定法的使用。

解冻和使用的电池的优点

对于依靠培养的细胞的任何研究的逻辑提前是考虑细胞作为关键试剂和提供他们在受控条件下制造,并且在大致相同的方式的其他试剂,例如介质,补充和血清进行测试QC-测试性能。冷冻,解冻和使用的格式已经由专门从事生产的细胞产生更多一致的响应和帮助尽量减少检测到试验变化制造商通过严格的质量控制检测了细胞,研究人员对研究人员甚至lab-到实验室。


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使用使用细胞也可以减少产生效果的时间。细胞被解冻并像其他试剂一样使用,而不是在使用前培养和传代多次,消除了细胞培养的不一致性,加快了研究过程——将需要培养细胞的实验时间从1-2周缩短到24小时。

解冻和使用的电池的应用减少了所需的细胞培养活动所需的资源和实验室空间。不仅是成本的降低,但很少人需要访问小细胞培养的空间,使身体保持距离在实验室更容易一些。

在培养的细胞减少变异

你可能无法使用解冻和使用的细胞的一切,但你仍然可以减少变异的细胞培养,尤其当你锁定后恢复您的研究活动。这里有几个技巧(1,3):

  • 总是从可信来源获得的细胞
  • 执行污染的常规检测
  • 保持一致的培养条件
  • 控制细胞数量的变化
  • 操作电池时要小心
  • 测试以验证细胞系的身份
  • 从稳定可靠的厂家获得培养基
  • 注意:所有血清补充的很多,来源

参考文献

  1. 李。J.(2018)如何降低细胞培养变异亚搏足彩3月23日。
  2. TerWee,J.A.(2011)增加了直接使用低温保存的生物测定常规效力检测的一致性和效率(准备直接制版)细胞j . Immunol方法370:65-74。
  3. Arduengo, m (2012)对于成功的基于细胞分析II注意事项:细胞培养条件亚搏足彩1月11日。

想了解更多关于细胞作为试剂的知识吗?11月18日星期三,Promega公司的Terry Riss博士将在高通量筛选和发现铅的试验指导研讨会上发表“将细胞作为设计可重复性试验的试剂”。了解更多关于研讨会和register参加会议。


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免疫反应涉及两个互补的途径:先天免疫和适应性免疫。先天性免疫是非特异性,快速,损伤或感染后很快发生。由于先天免疫反应的结果,细胞因子(小信号分子)分泌到募集免疫细胞到损伤或感染部位。先天免疫不发展的抗原或授予长期免疫的“记忆”。

免疫反应涉及互补途径:先天免疫和适应性免疫。

不像先天免疫,获得性免疫是抗原依赖性都和抗原特异性的,这意味着适应性免疫应答需要的触发抗原类似病毒的表面上的刺突蛋白的存在。适应性免疫应答也针对特定抗原触发响应。适应性免疫应答需要更长的时间来开发,但它在存储器B和T细胞的形式为存储器的容量。这个存储器,是使快速,特异性免疫应答(免疫)在随后暴露于抗原。

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利用分子生物学和生物化学检测血液兴奋剂

监测运动员中的使用性能增强的物质是复杂的,用于测试和检测使用这类物质的检测要求在过去的几十年显著改变。

的血液学(血液)模块运动员生物护照由世界反兴奋剂机构2009年通过的12月1日,(ABP)。该模块规定了标准协议来监控通过查看生物参数的变化掺杂的专业运动员,而不依赖于检测体液中的非法的化合物。这样的生物方法消除了需要开发和验证了测试,以检测可被用于掺杂的每一个新的化合物。总部基地的当前版本,在2014年通过的,还增加了从尿液样本监测的某些类固醇的使用指标。

血液兴奋剂,其目的是增加红细胞使更多的氧可以被输送到肌肉耐力增加或性能是特别难以检测。通常有三种方法,它是完成的:使用促红细胞生成素(EPO)或合成的氧载体和输血。尽管可以检测到大体积的血液或使用EPO的输血,微剂量的EPO或输血聚集的红血细胞的较小体积是更难检测。

尼古拉斯·洛伊恩贝格在瑞士实验室兴奋剂分析有同事开发了一种方法以检测血液掺杂。除了解决血液兴奋剂的检测,他的实验室还担心放宽对样品的运输和存储需求,并确保样品采集不运动员的表现产生不利影响。

改善血液样本的采集和存储

由于样本采集和存储是准确的测试结果非常关键,任何新的试验发展到从易于收集和储存的检测血液兴奋剂的好处。该实验室洛伊恩贝格调查使用的TAP™按钮收集装置,它被誉为采血用简单的方法,易于使用,并消除了痛苦的针扎或手指刺会影响运动员表现的需要。TAP收集之后,从装置的血液20μL置于到滤纸上并干燥(干燥的血液样本; DBS),其是从多站点集合来存储和运输更容易实验室。

一种RNA生物标志物血液兴奋剂

血液抽取和自体输血或重组人EPO注射刺激红细胞生成和幼红细胞可以基于它们的基因表达图谱进行区分。一个由幼红细胞表达的基因是aminoleuvulinate合酶2中,编码的酶ALAS2参与血红素,RBC成熟期间的通路活性的合成的基因。RNA转录物是不稳定的并且倾向于迅速降解,因此,从所收集的样品中分离线性的RNA转录物是困难的。然而环状RNA(circRNAs)是一类由预的mRNA是高丰度,相当稳定和维持细胞类型特异性表达的backsplicing产生的RNA分子组成。所述洛伊恩贝格实验室开发了一种方法,用于测量的线性和环状的形式ALAS2DBS中的RNA监测红细胞生成。

在开发这一协议的最大挑战之一是实现高效RNA提取仅20ul干血液。Leuenberger和他的同事采用了两步净化;从苯酚开始:在DBS上提取氯仿,然后在the上进一步纯化Maxwell®RSC自动化仪器, 使用麦克斯韦RSC miRNA的血清和血浆包。从手动切换到用于第二步骤的自动化方法是至关重要的。它减少了污染的可能性,以及减少移液误差,而不损害良好的质量和因此的RNA有助于测定再现性产率。到血液光斑内正常化卷,协议使用RNA产生由管家基因。自动化验工作已经发表在生物分析法。

下一步是什么

该协议被测试,以查看是否EPO或小输血微剂量也可通过在DBS监测ALAS2 RNA表达进行检测。兴奋剂分析的瑞士实验室还是开发的方法通过从全血样品中分离质粒DNA,以检测基因兴奋剂的过程中,使用麦克斯韦RSC

此外,所用的收集和储存方法有临床意义,尤其是对于那些需要血液常规监测的患者。的能力来隔离环状RNA的节目在许法医的应用程序识别体液。

10个技巧,以保持身体疏远的实验室

实验室可以为拥挤的地方。我们已经习惯了周围其他人的工作,折腾的想法来回。黑暗的房间,冷库和大型设备的空间往往是由几个实验室共享。一些实验室已经响应完全关闭COVID-19大流行;人,尤其是那些实验室做冠状左右生物学,试验和检测和药物开发研究的不断运行。对于那些实验室,维持推荐的6英尺(2米)的距离,以帮助阻止冠状病毒大流行是不容易的。

在Promega公司我们的运作,保证质量,应用和研发实验室的建立和运行,专注于提供尽可能多的支持,可能我们的合作伙伴谁正在研究,诊断和开发治疗新冠肺炎。与此同时,我们最大限度地提高我们员工的安全。以下是我们发现保持在我们的实验室临界距离,可能会帮助您的实验室组保持高效和安全的过几种方法。

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RNA提取用于临床试验,不与家庭酿造试试这个

本博客与珍妮弗Romanin,高级总监IVD运营与全球服务和支持,罗恩惠勒,高级总监,质量保证和法规事务的Promega公司太多指导写

一趟下来记忆里

在过去的日子里,我们都要在雪地里走两英里上山去实验室,提取RNA和DNA就像在家里酿一样。你自己做缓冲液,自己准备柱,花几个小时裂解细胞,离心样本,收集荧光,溴化硼染色的RNA条带,在暗室从一个悬挂在紫外箱上方的试管中。就像啤酒酿造大师调整他们的协议来生产更好的啤酒一样,你也可以调整你的方法,成为RNA的“主隔离者”。您可能会得到大致一致的结果,但不能保证您的协议在新手手中也能工作得很好。

进入生物技术公司具有高度控制的条件比你家酿造方法提供更高质量和可重复性下生产的RNA和DNA提取试剂盒,试剂盒和列。这些系统使我们能够设计出更加敏感下游检测的测定法依赖于高品质的输入DNA和RNA,例如RT-qPCR测定,可以检测在仅含有数百个细胞拭子的特定RNA分子的存在。通过这些分析,从家庭酿造隔离污染物会导致假阳性或假阴性或简单地混为一谈的结果。与预先批准的标准协议以高度受控的环境中制造的试剂是用于超灵敏的测试和测定等用于检测SARS-CoV的-2(使COVID-19病毒)的那些关键的。

制造工具的科学家的科学

如果你生产的系统将被送到不同的实验室,由不同技能的人使用,但是产生的结果可以在不同的实验室之间进行比较,有几个标准必须要满足。

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构建协作研究网络,以解决罕见病

2016年6月初

克里斯有一个月左右的时间腿部极度疼痛。疼痛来了又去,慢慢地,但有时极度强烈。根据x光,一位整形外科医生诊断出他的腿筋撕裂,目前正在好转。我们被送回家休息,用冰敷他的肌肉。

一个星期天,克里斯在游泳池玩5个小时了,并没有畏缩一次。接下来的一周,他很好,所以他去练足球在周三和游泳队练习的第二天。11时30分,当晚他醒了呼天抢地。同样的腿。同一地点。再次回来。

后期2016年6月

我们在希腊都在度假。又开始疼痛,严重的紧张和可怕的,所以不好他无法睡觉平躺在床上。绝望中,我们在希腊住进了医院......当地儿科医生是美好的,并建议我们飞回家,看到一个骨科大夫尽快......一个可怕的飞行家:没有答案,在我们的胃坑。克里斯是在轮椅上。

2016年七月

我们终于拿到了骨科医生下令MRI。的MRI结果每一个家长担心什么:“白血病或淋巴瘤”,并转介到肿瘤学家。经过多次侵入性检查,肿瘤科医生说,这是可能不是癌症。我们觉得这样的救济,但我们留下没有答案,他所有的痛苦。我们转移到传染病。

2016年8月

传染病专家说他们不能培养任何东西,所以他们不相信克里斯有感染。再一次,不完整的答案。然后我们就去学风湿病。得不到任何答案的挫折感和我们的孩子仍在痛苦之中,让人心碎、孤独和恐惧。

基于骨活检和核磁共振成像,风湿病学家最终给了Chris一个诊断:慢性复发多灶性骨髓炎(CRMO通常缩写为“chromo”)。

好消息是:这是不是癌症;坏消息:很少有人知道关于CRMO,因为它是一种罕见的疾病。

继续阅读“建立合作研究网络以解决罕见疾病”

快速检测检测SARS-2冠状病毒在巴西开发

在联邦大学巴伊亚(UFBA),由古比奥·苏亚雷斯博士领导的实验室病毒,已开发利用快速和具体的实时PCR检测GoTaq 1步RT-qPCR的用于检测导致呼吸系统疾病COVID-19的sars -2冠状病毒(以前称为2019-nCoV的冠状病毒)。的麦克斯韦RSC仪器用于在试验前通过拭子或支气管冲洗从口咽分泌物中自动提取RNA。这种冠状病毒特异性检测可以将SARS-2-CoV的识别时间从48小时缩短到3小时(1),及时为公共卫生官员提供重要信息。

“Promega一直为我们提供标准PCR和实时PCR以及核酸提取的试剂。这是一个我可以信赖的关系;他们是我们的合作伙伴,在技术和资金上都提供了出色的支持。Promega是我们所有试验的基础。”古比奥·苏亚雷斯博士

苏亚雷斯博士的实验室有开发鉴定和检测新出现的病毒病原体的分析方法的经验。他们的实验室首次发现Zika病毒的病原体的大暴发急性exanthematous疾病(AEI) 2015年4月在巴西东北部(2)。Zika病毒最终被宣布为突发公共卫生事件的国际重要性由世界卫生组织在2016年2月,头小畸型的发生率增加后发现婴儿的妇女在怀孕期间感染。在管理寨卡病毒危机中吸取的许多教训告诉我们,科学家正在如何处理sars -2冠状病毒。寨卡病毒应对的特点是在全球科学实验室之间共享数据、样本和资源的协作精神。

下面是来自巴西的描述对SARS-2-CoV的苏亚雷斯博士的小组工作视频链接(葡萄牙语音频)。https://globoplay.globo.com/v/8302334/

源引

  1. 电视巴伊亚在UFBA开发的3个小时可识别冠状病毒(2020)测试,说研究员。[互联网:https://g1.globo.com/ba/bahia/noticia/​​2020/02/07/teste-desenvolvido-na-ufba-pode-identificar-coronavirus-em-3h-diz-pesquisador.ghtml访问:2020年2月19日]
  2. 桑德勒,N.(2016)兹卡:个人观点,全球应对Promega公司。[互联网:https://www.promega.com/Resources/PubHub/Inspiration/Zika%20Perspectives%20Responses/访问:2020年2月19日]

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