荧光标记的艰难梭菌生物学研究

梭状芽胞杆菌难相处的是一种细菌,在美国每年感染大约50万人。这种感染会导致腹泻和严重结肠炎等症状,是住院期间最常见的感染之一。作为全球的发病率c . diff感染在过去十年中升起,因此促进了新的治疗策略的压力。这需要彻底探索所有方面梭状芽孢杆菌生物学。

莱顿大学的研究人员出版的两个论文揭示了闪光梭状芽孢杆菌使用HiBiT蛋白标记的生理学。HiBiT系统可以使用11个氨基酸标记检测活细胞中的蛋白质。HiBiT标签与互补的LgBiT多肽结合,重组发光的NanoBiT®酶。所得的发光与存在的hibit标记蛋白的量成比例。

染色质结合蛋白梭状芽孢杆菌

负责组织和压实核酸的蛋白质引起了潜在的药物靶标。HU / IHF蛋白质家族是最丰富的细菌染色质结合蛋白。胡蛋白已被展示大肠杆菌和其他细菌稳定的超底硅酸钠和调节染色体构象。胡蛋白已被证明对细胞活力至关重要枯草芽孢杆菌,有一个hu蛋白,但它不是必需的大肠杆菌,有三个。

一篇2019年的论文分子生物学杂志首先检查的是细菌染色质蛋白吗C.艰难。在这项研究中,作者确定了h基因梭状芽孢杆菌,与中同源物显示了显著的序列同一性大肠杆菌,B.枯草芽孢杆菌金黄色葡萄球菌。Hupa蛋白还显示出三个保守的精氨酸残基被证明是DNA结合必需的。

色谱和Western blot实验表明,HupA形成同型二聚体体外,但作者想要确定这是否发生了体内。检查蛋白质相互作用体内,研究人员遗传融合了HUPA至改性纳米甲基特的两个亚基的C末端®蛋白质。当表达两个融合时,检测到发光信号。这表明Hupa形成二聚体,从而使纳米管®亚基一起重组荧光素酶。

本研究还使用了霍巴塔来检查HUPA的定位。哈利塔®技术基于35kda·哈拉塔之间的共价结合®蛋白质及其各种配体。荧光卤陶®配体可以用来可视化蛋白质在细胞内的位置。HupA-HaloTag融合表达梭状芽孢杆菌,本地化模式类似于其他细菌中的胡蛋白的模式,并且核苷酸出现压缩。相反,当HUPA突变以降低其DNA结合能力时,蛋白质分布在整个细胞中,并且不压实核。

请查看完整的方法并了解更多梭状芽孢杆菌染色质结合蛋白:

paiva a.m.o.,。(2019)细菌染色质蛋白质Hupa可以重塑DNA并与核苷酸缔合艰难梭状芽胞杆菌J Mol Biol.431,653-72。

毒素表达的调节因子梭状芽孢杆菌

梭状芽孢杆菌含有这两种毒素的基因座(PaLoc)也编码了毒素基因表达的正调控因子TcdR和负调控因子TcdC。目前已知TcdC是一种膜相关蛋白,但对其拓扑结构和功能知之甚少。

在一篇2020年的文章中细菌学杂志,Nano-Glo®HiBiT细胞外检测系统用于测定TcdC在膜中的c端取向。将SmBiT标签附着在TcdC的c端,加入LgBiT产生发光信号。由于LgBiT太大,无法通过细胞膜,信号表明TcdC的c端位于细胞外环境。

HiBiT系统也被用来证明膜-近端半胱氨酸残基是膜结合TcdC的必要条件。当半胱氨酸51残基突变为丝氨酸时,上清液中荧光素酶活性增加。然而,WT和突变体的细胞和培养基的总荧光素酶相同,说明这一增加与表达的变化无关。

阅读论文,了解有关使用HIBIT进行拓扑研究的更多信息梭状芽孢杆菌这里:

Paiva,A.M.O.等等。(2020)的c端域梭氧化钛艰难梭罗TcdC暴露在细菌细胞表面。J细菌

在这些博客帖子中探索HIBIT技术的更多应用:

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他在西北大学的细胞生物实验室转了一圈,获得了生物学/神经科学的学位,然后在科学写作中找到了自己的激情。主要研究方向包括免疫治疗、昼夜节律和神经发育。有趣的事实:乔丹在大学里经营了几年的讽刺报纸,尽管现在他在他的文章中大多讲的是真相。不打字的时候,乔丹喜欢做陶器和户外烹饪。“如果我对你说,‘不要想大象’,你会怎么想?”——阿瑟(约瑟夫·高登-莱维特)《盗梦空间

一个周到的评论

  1. 感谢您的精彩帖子,关于我们使用荧光素酶阐明Cdiff生理学。实际上,我想指出还有另一篇论文使用了这个:https://pubs.acs.org/doi/10.1021/ acssynbio.6b00104在这篇早期的手稿中,我们制作了一种用于Cdiff的分泌荧光素酶报告物,消除了样品的复杂处理。我们已经在后续的工作中使用了它(参见例如PMID: 30455241 PMID: 32938698)。有趣的是,我们开发的工具也可以用于金黄色葡萄球菌(见位于谢菲尔德的科里根实验室的工作)。

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