从活细胞到裂解物:纳米比特适应生化分析格式

在药物筛选中,靶向低溶解度或弱结合亲和的蛋白质相互作用的能力是一个重大挑战。我们在实验室中经常遇到的这些挑战的美妙之处在于,找到这些问题的解决方案并不一定需要全新的工具。有时候,我们已经有了合适的工具,只要有一点创造力和协作,它们就可以适应当前的挑战。

在下面的视频中,博士后研究员Mohamed (Soly) Ismail博士向下的实验室弗朗西斯·克里克研究所(Francis Crick Institute)的一位研究人员提出了一个完美的例子NanoBiT®蛋白:蛋白相互作用分析。通过与Promega R&D Scientists的合作,Ismail博士已经将该分析转化为一种无细胞的生化格式,称为NanoBiT生化分析(NBBA)。

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最初作为活细胞测定,Nanoluc®二进制技术(Nanobit)是一个由两个组成的生物发光结构互补报告管理系统NanoLuc®荧光素酶子单元:a Large BiT (LgBiT)和Small BiT (SmBiT)。在蛋白质方面:蛋白质相互作用(PPI)研究中,相互间亲和性较低的LgBiT和SmBiT被融合到两个感兴趣的靶蛋白上。当这两个蛋白质相互作用时,这些亚基聚集在一起形成一种活性酶,并产生一个明亮的发光信号。

在他们的最近的刊物, Dr. Ismail和他的同事使用他们的NBBA作为一个主要的高通量筛选工具来检测RAS:RAF和RAS:PI3K蛋白的小分子抑制剂:蛋白质相互作用,癌症药物发现研究的关键目标。

通过这项研究,研究团队能够证明NBBA足以检测弱和强的PPI,并响应各种PPI抑制剂。随着对小型和大规​​模筛选方法的额外适应性,毫无疑问,这种可重复性的,经济效益的测定将为困难的PPI目标的药物筛查制作出色的补充。

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娜塔莉是Promega的科学作家。她在威斯康星大学麦迪逊分校获得微生物学学士学位,并在科蒂学院获得科学副学士学位。在她的业余时间,她可以打排球,做音乐,做她那堆永无止境的手工项目,和动物一起做志愿者。

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