回顾:无细胞表达系统帮助表征参与缺氧反应的蛋白质

HIF-1A-PVHL-ELONGINB-ELONGINC复合物的结构
HIF-1A-PVHL-ELONGINB-ELONGINC复合物的结构

威廉·凯莱林Jr.,先生彼得J. Ratcliffe和Gregg L. Semenza被授予2019年诺贝尔生理学或医学奖为了发现细胞如何感觉和适应氧气可用性。

Kaelin和Ratcliffe的实验室将其努力集中在转录因子HIF(缺氧诱导因素)上。该转录因子对于核心可用性变化的细胞适应性至关重要。

当氧水平升高时,细胞中含有很少的HIF。泛素通过VHL复合物加入到HIF蛋白中,并在蛋白酶体中降解。当氧水平低(缺氧)时,HIF的数量增加。

2001年,两组发表了表征VHL和HIF之间互动的文章,这些文章由诺贝尔奖组织参考他们的新闻稿关于今年的奖项。(1,2)。这两项研究证明,在正常氧气条件下脯氨酸残基P564的羟基化能够识别和结合HIF。

使用细胞自由表达(即,TNT耦合转录/翻译系统)通过两个实验室都是VHL的表征的关键:HIF交互的实验室使用HIF和VHL35.-S标记通过在正常或缺氧工作站的TNT系统产生的标记蛋白:

  • 确定氯化亚铁和氯化钴对相互作用的影响
  • 映射发生交互所需的HIF所需的特定区域(556-574)
  • 确定HIF点突变对相互作用的影响
  • 使用合成肽来阻断相互作用
  • 结论:哺乳动物细胞中的一个因子是相互作用发生的必要因素。

文学引用

  1. 伊万,M.。(2001)HIF脯氨酸羟基化靶向vhl介导的破坏:对O2传感科学292.: 464 - 67。
  2. Jaakkola, P。等等。(2001)通过o的von Hippel-lindau u相互靶向o的HIF-α2- 调节脯氨酰化科学202,468-72。

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Gary Kobs.

战略营销经理Promega Corporation
加里赢得了他的B.。在1982年的UW-Madison中,1982年至1986年,他在UW-MOMISON担任研究科技。从1986年到目前的加里一直在帕尔梅斯公司为许多能力提供服务,包括作为Promega笔记的第一个编辑。他还是经理技术服务和培训,产品经理限制/改性酶,产品经理蛋白质分析,现在是营销经理蛋白质分析。亚搏足彩

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