Remdesivir的调查作为可能的治疗SARS-2-CoV的(2019-nCoV)

Remdesivir(RDV或GS-5734)在SARS-CoV的-2(以前2019-nCoV)的第一种情况下的在美国的治疗(1)而使用。RDV是不能在任何国家批准的药物,但已要求一些机构的全球,协助打击SARS冠状病毒2型病毒(2)。RDV是腺嘌呤核苷酸单磷酸酯类似物表现出抑制埃博拉病毒复制(3)。RDV是生物活化的三磷酸酯形式的细胞内,并且充当用于复制必要RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp进行)的替代衬底。在导致抑制引物延伸产物的提前终止的模拟结果的掺入。

需要注意的是装饰的病毒的外表面的尖峰,其赋予周围病毒粒子,显微镜观察电子时电晕的外观。在该视图中,所述蛋白质颗粒E,S,M,和HE,也位于所述颗粒的外表面,都被标记为好。一种新的冠状病毒被确定为武汉市第一次检测的呼吸疾病爆发的原因,中国在2019年。
该图示中,在疾病控制中心和预防中心(CDC)创建的,揭示了通过冠状显示出超微结构形态。图片来源:艾丽萨·埃克特,MS;丹希金斯,MAM CDC

为什么在RDV所有利益作为SARS-COV-2治疗?许多在RDV的利息是由于一系列的通过与Gilead Sciences公司合作,在北卡罗莱纳州教堂山分校(拉尔夫S.巴里奇的实验室)和Vanderbilit大学医学中心(马克·R·丹尼森的实验室)大学合作组进行研究。

冠状病毒的复制依赖于病毒的RdRp,以及用于复制。希恩,(4)决定审查RDV的冠状病毒复制的影响,尽管RDV核心核苷,GS-441524,是对SARS冠状病毒是无效的早期报告(5)。希恩和他的同事开发NanoLuc®荧光素酶(NLuc)- 标记和SARS冠状病毒MERS为RDV是否能抑制复制的快速评估。研究在人肺上皮细胞系,将Calu-3 2B4,证明化合物抑制MERS-NLuc病毒复制的IC500.03μM的当细胞在48小时期间与病毒的MOI 0.08挑战。该化合物单独由所判定没有表现出细胞毒性的的Calu细胞在至多10μMRDV测试的CellTiter-Glo®检测。进一步的研究证明在人呼吸道上皮细胞培养物中的病毒滴度和病毒RNA的剂量依赖性降低两者SARS和MERS CoV的通过RT-qPCR来判断。RDV功效也被证明在SARS CoV感染的小鼠模型。有关使用RDV的一个关键点是,它需要被感染之前或到极限肺损伤后不久或者施用。政府在峰病毒滴度可能已经发生了不正确的肺损伤。

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一种可能的治疗为MERS冠状病毒的电流的临床试验目前正在进行中使用沙特组合洛匹那韦,利托那韦和干扰素β(LRI; 6)。希恩,。(7)研究了如何将RDV相比于试验治疗执行。使用NLuc标记MERS-CoV的示出几乎相同的易感性RDV作为野生型病毒,所述治疗在细胞模型进行评价,证明RDV比单独的试验化合物或所有三种试验化合物的组合更有效。该实验室开发用于MERS-CoV感染的分析的小鼠模型并发现RDV小鼠的该感染前和早期感染治疗减少肺病毒载量和严重的肺病理学。相反,用LRI预感染治疗稍微降低病毒载量,而不会影响其它疾病参数。感染后治疗LRI没有降低病毒载量或服务器肺病变。

阿戈斯蒂尼,(8)检测的RDV如何抑制冠状病毒的复制的机制。的冠状病毒基因组编码为核糖核酸外切酶(外显子),以及所述的RdRp。外显子中所证明实验室供应校正功能和以前的工作,所述外显子的活性防止灵敏度于诱变剂像像5-氟尿嘧啶和利巴韦林(9)。该实验室选择了一个模型的冠状病毒,鼠肝炎病毒(MHV),以调查在冠状病毒易感性RDV外显子功能。治疗RDV或母体核苷GS-441524以剂量依赖的方式与所述RDV是超过30倍更有效的降低MHV病毒滴度。类似的结果SARS冠状病毒和MERS-CoV的获得。敲除的外显子导致到RDV 100倍增加的敏感性表明野生型MHV,尽管功能性外显子系统,仍然并入RDV到病毒RNA。像与SARS冠状病毒的研究较早,RDV用量的时机很重要。在蜂窝式模型,remdesivir给药2之间-2至小时后感染severly限制病毒复制。

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任何病毒A关注的是生产治疗性病毒变异的可能性。MHV在GS-441524的存在和传代分离一个发现过去23个通道才能生存。基因组的测序揭示6个突变最明显的是2 MHV的的RdRp内。这两个残基在许多冠状病毒基因组包括SARS和MERS是保守的。这两个突变成野生型肝炎病毒的简介导致具有几乎相同的特性,通道23 MHV病毒。无论是双突变体MHV和P23 MHV仍然容易受到RDV,只需要更高剂量。双突变体MHV是一个不太适合的病毒与在不同的比例野生型病毒共感染的研究经过四代产生了几乎唯一的野生型病毒。这两个突变引入SARS冠状病毒的介绍得到几乎相同的故事在双突变体是RDV更有抵抗力。这项研究与NLuc标记的野生型和双突变体SARS冠状病毒进行。使用小鼠模型系统如前所述(4),双突变体比野生型病毒致病力较弱。

最近给编辑的信由王,等。(10)报告,RDV是测试抗病毒剂的面板之间的最有效的SARS-CoV的-2的临床分离株的体外抑制剂。有趣的是,他们还观察到基本上抑制由抗疟疾药,氯喹。氯喹已知内涵体抑制酸化,并且可以与病毒的内化干扰。

参考文献:

  1. Holshue,M.L.,等。(2020)2019在美国的新型冠状病毒的第一案。新英格兰。J.医学。DOI:10.1056 / NEJMoa2001191
  2. Gilead Sciences公司,1月31日2020年“关于公司对2019年新型冠状病毒(2019-nCoV),目前正在进行响应Gilead Sciences公司声明” [在线]。可用:https://www.gilead.com/news-and-press/company-statements/gilead-sciences-statement-on-the-company-ongoing-response-to-the-2019-new-coronavirus。[2010访问时间2月12日]
  3. 沃伦,T.K.,等。(2016),小分子GS-5734针对埃博拉病毒在猕猴中的治疗功效。性质431,381-5。
  4. 希恩,T.P.,等。(2017)广谱抗病毒药GS-5734同时抑制疫情和人畜共患冠状病毒。科学。译。MED。9,eaal3653。
  5. 町,A.,等。(2012)合成和一系列的1'-取代的-4-氮杂-7,9- dideazaadenosine C-核苷的抗病毒活性。生物有机。MED。化学。快报。22,2705-7。
  6. 阿拉比,Y.M.,等。(2018)中东与洛匹那韦,利托那韦和干扰素beta1b(MIRACLE试验)的组合呼吸综合征的治疗方法:研究协议的随机对照试验。试验。19,81。
  7. 希恩,T.P.,等。(2020)remdesivir和洛匹那韦的组合,利托那韦的比较治疗功效,和干扰素对MERS-CoV的测试纳特。通讯。11,222。
  8. 阿戈斯蒂尼,M.L.,等。(2018)冠状病毒易感性的抗病毒remdesivir(GS-5734)由病毒聚合酶和校对核糖核酸外切酶介导的。姆比奥9,e00221-18。
  9. 史密斯,E.C.,等。(2013年)冠状病毒核糖核酸外切酶缺乏活动很容易受到致命的突变:校对和潜在疗法的证据。公共科学图书馆Pathog。9,e1003565。
  10. 王,M.,等。(2020)Remdesivir和氯喹有效抑制最近出现在体外新型冠状病毒(2019-nCoV)。细胞研究。DOI:10.1038 / s41422-020-0282-0

拉尔夫S.巴里奇博士链接:https://sph.unc.edu/adv_profile/ralph-s-baric-phd/

马克河丹尼森博士链接:https://www.vumc.org/denison-lab/laboratory-mark-denison-md

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凯尔·胡珀

一位前技术服务科学家,凯尔还与R&d工作了产品的开发,现在专注于支持Promega的细胞分析产品在北美。

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