NanoLuc®荧光素酶的权力超过报告基因分析

明亮NanoLuc®荧光素酶

NanoLuc®荧光素酶已经在这个博客上讨论过很多次,我们的网站因为这种酶对于研究遗传反应和蛋白质动力学是不可或缺的。虽然NanoLuc®荧光素酶最初作为报告酶被引入以评估启动子活性,但它的能力已经远远超出了基因报告酶的范围,创造了用于研究内基因蛋白相互作用、靶点参与、蛋白质降解等的工具。那么NanoLuc荧光素酶从何而来?一种酶如何为多种技术提供动力?

NanoLuc®荧光素酶的故事始于一只深海虾和它的生物发光酶,这种酶是在Promega科学家的一些改进下进化而来的。结果是:一个19kDa的小报告酶的发光信号比萤火虫或亮100倍Renilla荧光素酶。NanoLuc®荧光素酶的信号强度提供了可以用于研究低水平蛋白质表达和内源蛋白质一个敏感的报告。此外,工程化NanoLuc®萤光素酶装置的小尺寸的酶能够用于而不破坏包装来创建报告病毒或使用CRISPR-Cas9基因编辑测量内源表达。阅读NanoLuc®荧光素酶是如何在开发这篇文章

通过这样的亮酶,萤光素酶NanoLuc®将是衡量分子接近生物发光共振能量转移(BRET)测定的理想发光供体。我们把它更进一步,合作NanoLuc®荧光素酶与售后服务投诉书蛋白及其荧光配体创造NanoBRET™检测。明亮,从供体NanoLuc®与远红移常规试剂订购受体结合蓝移信号产生相比于常规测定法BRET的蛋白质相互作用测定法具有最佳的光谱重叠,增加的信号,并降低背景。本文介绍如何活细胞NanoBRET™试验被开发

您不仅可以测量蛋白质:蛋白质相互作用,但NanoBRET™技术增强了活细胞目标交战(TE)测定这一措施如何紧紧一种化合物结合蛋白质(复合亲和力)和多少化合物结合蛋白质(靶蛋白占用)。你甚至可以评估多久生理条件下的蛋白质结合靶蛋白(停留时间)。如何阅读在活细胞中NanoBRET™技术措施,目标交战

而基于BRET的测定是评估如何蛋白相互作用的一种方法,另一种方法涉及使用两个亚基与低结合亲和力在结构上彼此互补,以产生明亮的发光酶。所述NanoLuc®二进制技术或NanoBiT由大的比特(LgBiT)的,一个18kDa蛋白,和小一点(SmBiT),一个1.3kDa肽。当融合到靶蛋白和两个靶蛋白相互作用,带来SmBiT和LgBiT在一起的两个亚单位只能形成的酶。了解NanoBiT是如何在这个发展ACS化学生物学文章

虽然NanoLuc®荧光素酶可能是一个小报告酶,有一个只有11个氨基酸的小肽将有助于测量内源性蛋白质丰度。HiBiT和LgBiT之间的高亲和力结合在底物存在时产生明亮的发光信号。利用CRISPR-Cas9基因编辑将HiBiT插入到内源位点,标记感兴趣的蛋白,添加含LgBiT和底物的试剂,并测量发光。HiBiT标记为研究蛋白质丰度和动态提供了一种定量和敏感的方法。阅读使用CRISPR与HiBiT发光肽

NanoLuc®萤光素酶

想了解更多关于NanoLuc®荧光素酶和它的功能?看看我们NanoLuc®荧光素酶技术页面额外的资源和应用程序。

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萨拉克林克

技术文件撰稿人Promega公司
萨拉是土生土长的Wisconsinite谁在第五代奶牛场长大,并决定她想在12岁。她在威斯康星柏丽,在那里她获得了学士学位的大学接受教育科学家在生物学和威斯康星 - 麦迪逊大学获得的肿瘤她的第二个硕士学位之前,分子生物学硕士学位。她已经工作了Promega公司超过15年来,第一次作为一个技术服务的科学家,目前的技术作家。萨拉喜欢谈论她的娱乐鸡和尝试不打算她春园时过于雄心勃勃的羊群。

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