回顾:无细胞表达系统有助于鉴定参与缺氧反应的蛋白质

HIF-1a-pVHL-ElonginB-ElonginC复合物的结构
HIF-1a-pVHL-ElonginB-ElonginC复合物的结构

小威廉·g·凯林(William G. Kaelin Jr.)、彼得·j·拉特克利夫爵士(Sir Peter J. Ratcliffe)和格雷格·l·塞门扎(Gregg L. Semenza)获得了该奖项2019年诺贝尔生理学或医学奖因为他们发现了细胞如何感知和适应氧气供应。

Kaelin和Ratcliffe的实验室专注于研究转录因子HIF(缺氧诱导因子)。这个转录因子在细胞适应氧气供应变化中是至关重要的。

当氧气水平升高时,细胞中含有很少的HIF。泛素通过VHL复合物添加到HIF蛋白中,并在蛋白酶体中降解。当氧气水平低(缺氧)时,HIF的数量增加。

2001年,这两个小组发表了描述VHL和HIF之间相互作用的文章,诺贝尔奖组织在其报告中引用了这些文章新闻稿关于今年的奖项(1,2). 这两项研究都表明,在正常氧气条件下,脯氨酸残基P564的羟基化使VHL能够识别并结合HIF。

使用细胞自由表达(即,TNT偶联转录/翻译系统)这两个实验室在描述VHL:HIF相互作用方面发挥了关键作用。实验室利用了HIF和VHL35-S标记蛋白在正常或低氧工作站下通过TNT系统生成:

  • 测定氯化亚铁和氯化钴对相互作用的影响
  • 绘制发生交互作用所需的特定HIF区域(556-574)
  • 确定HIF点突变对相互作用的影响
  • 用合成的多肽来阻断相互作用
  • 结论是,哺乳动物细胞中的一个因子是相互作用发生的必要条件。

文献引用

  1. 伊凡,M. (2001)HIF靶向于脯氨酸羟化酶介导的VHL破坏:对O2传感科学292: 464 - 67。
  2. 贾科拉,P。et al。(2001)O。HIF-α靶向von hipel - lindau泛素化复合物2-调节脯氨酸羟基化科学202, 468–72 .

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