NanoLuc®荧光素酶比报告试剂更强大

明亮NanoLuc®荧光素酶

NanoLuc®荧光素酶已经在这个博客上讨论了很多次我们的网站因为这种酶是研究遗传反应和蛋白质动力学不可或缺的。NanoLuc®荧光素酶最初是作为报告酶被引入的,用于评估启动子活性,其能力已经远远超出了基因报告酶,创造了用于研究内源蛋白质相互作用、目标参与、蛋白质降解等的工具。那么NanoLuc®荧光素酶从何而来?一种酶如何驱动多种技术?

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从活细胞到裂解物:纳米比特适应生化分析格式

在药物筛选中,靶向低溶解度或弱结合亲和的蛋白质相互作用的能力是一个重大挑战。我们在实验室中经常遇到的这些挑战的美妙之处在于,找到这些问题的解决方案并不一定需要全新的工具。有时候,我们已经有了合适的工具,只要有一点创造力和协作,它们就可以适应当前的挑战。

在下面的视频中,博士后研究员Mohamed (Soly) Ismail博士向下的实验室弗朗西斯·克里克研究所(Francis Crick Institute)的一位研究人员提出了一个完美的例子NanoBiT®蛋白:蛋白相互作用分析。通过与Promega R&D Scientists的合作,Ismail博士已经将该分析转化为一种无细胞的生化格式,称为NanoBiT生化分析(NBBA)。

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Promega Authors的流行论文

Promega是一家化学和仪器供应商,为全球不同行业和研究实验室的科学家提供服务。真实的。但我们不仅仅是一家供应公司;我们是致力于支持其他科学家工作的科学家。我们希望我们开发的技术背后的科学得到科学界的广泛审查和重视,这是我们的科学家花时间准备和提交手稿给同行评审的期刊的原因之一。在这里,我们列出了一些在2019年被广泛阅读的已发表研究论文。在《ACS化学生物学仅promega发表的五篇论文就在2019年阅读量最高的10篇论文中。下面是对这些ACS论文的简要回顾。

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nanoluc:微小的标签,影响很大

合成生物学 - 基因工程有机体,做出或使某些东西有用 - 是每年IGEM比赛的核心目标。在团队征服克隆他们的基因的挑战后,下一个障碍正在证明工程基因表达所需的蛋白质(并且可能定量表达水平),它们可以使用报告基因进行它们可以使用报告基因。

报告基因也可以在iGEM项目中发挥更重要的作用,当团队用报告基因来设计他们的生物体,以检测特定分子的存在并发出信号,如环境毒素或生物标记物。的三个iGEM团队由Promega赞助今年选择合并一些版本NanoLuc®荧光素酶到他们的项目。

NanoLuc®荧光素酶是一种小型单体酶(19.1kDa, 171个氨基酸),基于深海虾的荧光素酶Oplophorus gracilirostris。这种工程酶使用一种新的底物,福莱玛嗪,产生高强度,发光型发光的atp不依赖反应。与其他标记和检测蛋白质的分子不同,NanoLuc®荧光素酶由于体积小,不太可能干扰酶活性和影响蛋白质生产。

Nanoluc®Luciferase还经过工程化为结构互补报告系统,含有大亚基(LGBit)和两种小亚基选择:低亲和力SMBit和高亲和力Hibit。这些Nanoluc®技术在一起提供了IGEM团队使用的生物发光工具箱,以解决多种生物挑战。

以下是每个团队项目的概述以及它们如何加入Nanoluc®技术。

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有点或布雷特,哪个更好?

现在Promega正在扩展其在内源性蛋白表达水平上检查活细胞蛋白质相互作用或定量的选择,我们在技术服务中是关于哪个选择更好的问题。答案是,与许多测定一样......这取决于!首先让我们谈谈什么是什么NanoBiTNanoBRET技术,然后我们将提供一些相似和不同之处,以帮助您选择最适合您个人需要的分析方法。继续阅读“有点或布雷特,哪个更好?”

2017年阅读量最高的5篇Promega论文

知道有人在读你的论文总是很好的。这表明你的研究是有趣的,有用的,并且对科学界有影响。我们很高兴地得知,Promega科学家发表的论文成为2017年该杂志阅读量最高的10篇论文ACS化学生物学。事实上,Promega的科学家撰写了阅读量最高的前六篇论文中的五篇!让我们来看看它们是什么。

# 5Crispr-介导的内源性蛋白质用发光肽标记

出版日期:2017年9月11日

2017年的这篇论文介绍了我们最新的明星:HiBiT,一个小小的11aa蛋白标签。对于任何研究内源性蛋白质表达的科学家来说拿标签系统你的梦想成真了吗?它结合了定量和高灵敏度的发光测量和一个微小的标签,可以很容易地通过CRISPR/Cas9基因编辑插入内源蛋白,而对天然蛋白功能的影响很小。HiBiT标签系统已经被《科学家》杂志列为2017年十大创新之一,它将极大地改变我们研究内源性蛋白质表达的方式。继续阅读“2017年最多五大读Promega论文”

使用NanoBiT™技术设计的大麻素受体激动剂的生物测定

大麻素。这些是什么?有时,维基百科可以给出一个很好的定义:

四氢环酚(THC),CB1和CB2大麻素受体的部分激动剂。维基百科公开
四氢环酚(THC),CB1和CB2大麻素受体的部分激动剂。维基百科公开

大麻素是一类不同的化学化合物,它作用于细胞中的大麻素受体,改变大脑中神经递质的释放。这些受体蛋白的配体包括内源性大麻素(动物体内自然产生的),植物大麻素(发现于大麻以及其他一些植物)和合成大麻素(人工制造的)。

合成大麻素(SCS)最初是为两个大麻素受体,CB1和CB2的科学调查创建,但已向街道作为大麻的“安全”和“法律”替代品。

问题是,这些SCs与大麻素受体的接触比任何从大麻中提取的东西都更彻底,亲和力更高。因此,SCs会产生严重的副作用,通常需要医疗护理。事实上,与使用大麻等天然大麻素来源相比,使用SC后寻求紧急医疗救助的可能性要高出30倍。继续阅读使用NanoBiT™技术设计的大麻素受体激动剂的生物测定

对于蛋白质互补测定,设计就是一切

大多数情况下,如果不是全部,细胞内的过程涉及蛋白质 - 蛋白质相互作用,并且研究人员始终正在寻找更好的工具来调查和监控这些相互作用。一种这样的工具是蛋白质互补测定(PCA)。PCA使用报告者,如荧光素酶或荧光蛋白,分为两部分(A和B),在一起时形成活跃的报告(AB)。分裂报告器的每个部分附着在形成X-A和Y-B的一对蛋白质(x和y)中的一种。如果x和y相互作用,则α和b均匀地形成活性酶(ab),产生可以测量的发光或荧光信号。从PCA测定中读出可以帮助识别将互动的条件或因素分开。

拆分报告基因时,一个关键的考虑因素是找到一个位点,让这两部分重组成一种活性酶,但又不能相互强烈吸引,导致它们自我联想并产生一个信号,即使没有相互作用的主要蛋白质X和y这个博客将简要描述NanoLuc®荧光素酶分为大、小片段(LgBiT和SmBiT),单独优化创建NanoBiT®试验和展示设计协助监测蛋白质相互作用。

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用纳米比特互补法研究线粒体裂变

在科学家选择奖中为NanoBiT™投票,并有机会从选择科学赢得500美元的美国亚马逊代金券。
在科学家选择奖中为NanoBiT™投票,并有机会从选择科学赢得500美元的美国亚马逊代金券。

动机
这是新的一年。无论你是一个自我完善狂,还是一个准备好迎接好事的人,你都有一个计划。你可能正在改变旧的锻炼习惯,或者尝试一种新的烹饪技术。

而在工作中,你会越挖越深;这是你阐明蛋白质相互作用的一年,这是你以前无法想象的。

好消息。有一种新的蛋白质互补试验可以提供帮助。Studying-mitochondrial-fission-poster

关于Nanobit.
Nanobit™补充记者NanoLuc®荧光素酶是一种最近开发的蛋白质相互作用分析方法,其特点是改进的NanoLuc®荧光素酶。NanoLuc最初是从深海虾中分离出来的,是一种小型荧光素酶,提供比萤火虫荧光素酶更亮的信号。

关于分裂荧光素酶系统
如果您正在询问两种蛋白质以了解它们的相互作用的条件,则拆分荧光素酶系统使您能够用荧光素酶亚单元标记每种蛋白质。标记蛋白的相互作用有助于亚基的互补,从而产生发光信号。继续阅读《用纳米比特互补分析研究线粒体裂变》

PPI研究的关键进展

小linkedin缩略图我们对微观世界的理解已经通过可用于监控和可视化蜂窝交互的工具来塑造。我们“站在巨人队的肩膀上”推动我们的研究甚至更高的高度。研究蛋白质 - 蛋白质相互作用(PPI)已经证明了我们对细胞新陈代谢,信号转导等等的富有成效。科学家开始构建整个生物体杂志(可靠于代谢物和基因组),这可能对理解和治疗疾病具有巨大影响。让我们沿着记忆道旅行,看看我们来自哪里。继续阅读PPI研究的关键进展