DNA测序在没有Leroy罩的情况下?

在我的科学职业生涯中,测序技术的变化发生了许多变化。在我作为研究生中旋转的研究实验室之一,我协助了一个手动放射性测序凝胶的第三年的毕业生,因为我被告知,“每个学生都应该在他们的职业生涯中至少运行一个”。我在研究生院之后的第一份工作是在序列细菌基因组的实验室中作为一个研究助手。虽然我是用于DNA测序管道的一个创建霰弹枪的文库,但使用用荧光染料标记的二脱氧核苷酸进行测序反应,并在热循环仪中扩增。通过手动加载在高板聚丙烯酰胺凝胶上(Applied Biosystems Abi 377s)分离所得片段,或者一旦实验室允许它们运行,一次496孔板的毛细管电泳(abi 3700s)。

自从我离开实验室后,测序吞吐量仅增加。这是通过增加毛细管电泳的板和毛细血管数量的孔和毛细血管数量的孔的密度来实现的,但更重要的是,随着短读,大规模平行的下一代测序方法的出现。下一代或NGS技术降低了序列所需的时间,因为同时测定许多序列,显着加速测序能力。仪器的尺寸也下降以及每个碱基对的价格,在我在实验室时使用的测量。每种基因组的1,000美元的长期预言阈值已经到来。现在,根据最近从纳米Obore会议的推文,您可以将测序模块添加到移动设备:

但是,没有Leroy罩和实验室中创建的原型自动化DNA测序仪,可以使用这种技术进行高吞吐量快速自动测序。作为其中的一部分威斯康星科学节和威斯康星州书节,我有机会在Leroy博物馆实验室,威斯康星州基因组中心和前博士生博士议长卢克蒂姆蒙曼和劳埃德M.史密斯博士。引擎盖:基因组学年的陷阱器“Timmerman”写的Leroy兜帽的传记“。史密斯博士不仅是用于Timmerman书籍的源头,而且他是四个人中被用于自动DNA测序仪器专利的人之一。

Promega主持了卢克Timmerman和Lloyd Smith,讨论了“引擎盖:基因组学年的流行者”,作为威斯康星科学节和威斯康星州书节的一部分。

Timmerman在蒙大拿州的童年谈到了Leroy兜帽,在CALTECH的本科教育中谈到了他的本科教育。他提到了Johns Hopkins的Medical School的Hood的时间以及他的时间在NIH公共卫生服务之前在博士前往Caltech开始他自己的实验室。

引擎盖不仅想调查科学中的大问题,而且想知道如何改进可用工具来调查问题。1980年,使用Sanger的手动放射性测序有一系列良好的实验。引擎盖表示,他是有远见的,我们需要自动化DNA测序。如果此过程可能是高速和高卷,则可以快速生成大量数据 - 能够迎接可能在基因组学中迎来前所未有的吞吐量的洞察力。

当史密斯在1982年加入引擎盖的实验室时,他是在那里进行研究的70人之一。因为史密斯有一个生物物理学和仪器背景,他最终参与了测序仪器的工作。毫不奇怪,在开发自动测序仪器期间,谁有谁有想法。Mike Hunkapiller压制四个染料,而一份染料。我们认为有四个荧光染料分配给每个基地(A,T,G,C),但这概念为已经大的技术任务增加了更多的技术挑战。史密斯解释了四年的时间来制作四个颜色基本标签测序,因为没有人知道如何将氟托斯纳入DNA。

史密斯评论说,这两个染料中的两个良好,但特别是一个更难合成。史密斯确实设法有四个染料一次工作,但是一个信号很低。引擎盖做了一个好的导师应该做的:推回低信号染料。因此,史密斯做了更多的工程来使化学效果很好。最终结果:Lloyd Smith是第一作者关于描述自动DNA测序的论文并列出了用于自动DNA测序技术的专利

1986年6月,在自然出版物中宣布了自动DNA测序仪的原型。CALTECH举行了巨大的新闻发布会宣布这款新机器。Leroy敞篷可能是司法欲望,它推动了其他人以实现他的愿景,但是在撰写关于这个原型仪器的言论时,引擎盖就没有提到任何工作年度才能让DNA序列机工作的其他人。正如Timmerman解释的那样,没有命名那些值得信用侵蚀的引擎盖的人在他的实验室和Caltech校园里。但是,自动化DNA测序驱动的突破纳入应用生物系统的开发将仪器带到市场上,提供用于测序人类基因组的潜在工具。

基因组学时代不会在没有Leroy引擎盖的情况下实现成果,并在他的实验室努力制作自动化DNA测序仪现实。从平板凝胶到毛细管电泳,用于在人类基因组项目期间测序的毛细管电泳,以在小时内测序整个基因组的巨大产量,DNA的自动测序已成为基因组学研究的一体化。今天正在实施个性化药物,因为我们有四种荧光染料,可用于指示可以快速检测那些染料的DNA序列和机器,将颜色转化为序列。基因组学年时代充满了使用四个染料来照亮作为移动作为个人设备的A,T,G和C和序列仪器。

以下两个选项卡更改以下内容。

Sara Klink.

技术文件撰稿人Promega Corporation
萨拉是一家位于第五代奶牛场的威斯康星州,并决定成为12岁的科学家。她在威斯康星大学 - 公园旁门教育,在那里她获得了B.S.在威斯康星大学 - 麦迪逊颁发的第二阶段肿瘤学位之前,在生物学和分子生物学硕士学位。她为Promega Corporation工作了15年以上,首先是一位技术服务科学家,目前是技术作家。萨拉喜欢谈论她的娱乐鸡群,试图在规划春天的花园时不要太雄心勃勃。

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